ELISA(酶联免疫吸附测定)中确实经常用到吐温(Tween),主要是Tween-20,它在这里的作用主要可以归纳为以下几点: 1. **增强洗涤效果**:在ELISA中,洗涤步骤是非常关键的,用于去除未结合的物质和非特异性结合的物质。Tween-20,作为洗涤剂,能够更好地清洗掉非特异性结合物质,从而提高ELISA的特异性和灵敏度。其含有的亲水基团和疏水基团,能够借助疏水基团与吸附在固相上的蛋白的疏水基团形成疏水键,削弱蛋白与固相的吸附,同时在其亲水基团与液相中水分子的结合作用下,促使蛋白质脱离固相而进入液相。 2. **降低非特异性结合**:Tween-20可以减少非特异性结合,这是通过破坏样本中可能存在的某些干扰物质(如蛋白质、脂质等)与固相载体(如酶标板)之间的非特异性相互作用来实现的。这有助于减少假阳性或假阴性结果的出现,提高检测的准确性。 3. **维持稳定的pH值和离子强度**:Tween-20在洗涤液或稀释液中的存在,可以帮助维持样本和抗体的pH和离子强度,从而保持它们的稳定性和免疫活性。 在具体操作中,Tween-20通常与磷酸盐缓冲液(PBS)结合使用,形成PBS-Tween 20(PBST)溶液,用于ELISA的洗涤步骤。如果没有PBST,虽然可以使用PBS代替,但需要注意这可能会影响洗涤效果,导致非特异性结合物质的残留,从而影响实验结果的准确性。因此,在进行ELISA实验时,最好使用PBST进行洗涤步骤。 总之,Tween-20在ELISA中起到了至关重要的作用,它不仅可以增强洗涤效果,降低非特异性结合,还有助于维持样本和抗体的稳定性。