在使用改良半叶法测定光合速率时，需要特别注意以下几个方面，以确保实验的准确性和可靠性： ### 一、样品选择与准备 1. **叶片的选择**： - 应选择对称性良好、厚薄均匀一致的叶片，以消除因叶片形态差异带来的误差。 - 确保叶片在植株上的部位、年龄、受光条件等尽量一致，以提高测定的代表性。 2. **预处理**： - 在田间预先选定有代表性的叶片，并进行挂牌编号，以便后续处理和数据分析。 ### 二、叶子基部处理 1. **目的**： - 破坏叶片输导系统的韧皮部，以阻止光合产物从叶中输出，同时尽量不影响木质部中水和无机盐分的输送。 2. **处理方法**： - 对于双子叶植物（如棉花等），可用刀片将叶柄的外皮环割约0.5cm宽，切断韧皮部运输。 - 对于单子叶植物（如小麦、水稻等），由于韧皮部和木质部难以分开处理，可用开水（90℃以上）浸过的纱布或棉花包裹的夹子，将叶片基部烫伤一小段（约20秒），或用110~120℃的石蜡烫伤韧皮部。此外，还可使用适当浓度的三氯乙酸（蛋白质沉淀剂）点涂叶柄，以杀伤筛管活细胞。 - 处理时需注意烫伤或环割的程度，既要确保韧皮部被破坏，又要避免对叶片造成过大伤害，影响其自然生长角度。必要时，可用锡纸、橡皮管或塑料管包绕处理后的叶片，使其保持原来的着生角度。 ### 三、实验操作与数据记录 1. **剪取样品**： - 叶片基部处理完毕后，按编号次序分别剪下对称叶片的一半（中脉不剪下），并按编号顺序将叶片夹于湿润的纱布中，带回室内进行后续处理。 - 记录剪取样品的时间，以便计算各叶片经历的光照时数。 2. **光照与暗处理**： - 剪下的叶片一半留在光下进行光合作用（记为照光叶片），另一半置于暗处进行暗处理（记为暗中叶片）。 - 保持两次剪叶的次序与所花时间尽量一致，使各叶片经历相同的光照时数。 3. **称重与比较**： - 将各同号叶片之两半对应部位叠在一起，在无粗叶脉处使用金属模板或打孔器切下同等面积的叶块。 - 将光暗处理的叶块分别置于称量皿中，在适宜温度下（如80~90℃）烘至恒重，并在分析天平上称重。 - 记录并比较光暗处理叶片的干重增量，用于计算光合速率。 ### 四、数据处理与计算 1. **计算光合速率**： - 光合速率（mg·dm^-2·h^-1）= 〔(光叶干重 - 暗叶干重) / 叶片切块面积 × 光合时间〕 - 由于叶片内光合产物主要为蔗糖与淀粉等碳水化合物，可通过乘以一定的系数（如1.47或1.5）将干物质重量转换为CO2同化量。 2. **注意事项**： - 确保实验条件的一致性，如光照强度、温度、湿度等，以减少外界因素对实验结果的影响。 - 准确记录和处理实验数据，避免人为误差对实验结果造成干扰。 ### 五、其他注意事项 - **实验时间**：实验应在晴天上午进行，此时光照条件较为稳定，有利于实验结果的准确性。 - **实验器材**：确保所有实验器材干净、干燥，避免对实验结果造成污染或干扰。 - **安全防护**：在使用化学试剂（如三氯乙酸）时，应注意个人防护，避免直接接触皮肤和吸入有害气体。 通过严格遵守上述注意事项和操作步骤，可以提高改良半叶法测定光合速率的准确性和可靠性。
