### 补体参与的溶血作用（经典途径）实验设计 #### 实验目的 了解补体参与溶血作用的经典途径，明确溶血发生的充要条件，包括抗体、补体效价的选择，以及合理设置阴性对照、阳性对照和空白对照。 #### 实验原理 补体参与的溶血作用是通过经典途径实现的，即抗原（如绵羊红细胞）与特异性抗体（如溶血素）结合后，激活补体级联反应，最终导致红细胞溶解。通过设置不同对照，可以明确溶血发生的具体条件。 #### 实验材料 1. **抗原**：2%绵羊红细胞悬液 2. **抗体**：溶血素（效价已测定） 3. **补体**：健康豚鼠血清（补体效价已测定） 4. **生理盐水** 5. **试管、吸管、水浴锅、离心机等** #### 实验步骤 ##### 1. 抗体与补体效价选择 - **溶血素效价选择**：根据前期效价测定结果，选择能引起明显溶血的稀释度，如1:1000。 - **补体效价选择**：同样根据效价测定结果，选择能引起完全溶血的最小补体量，通常为1:20至1:30稀释的豚鼠血清。 ##### 2. 阴性对照、阳性对照及空白对照的设定 **阴性对照**： - **无抗体组**：仅加入绵羊红细胞悬液、补体和生理盐水，不加入溶血素，观察是否发生溶血。 - **无补体组**：仅加入绵羊红细胞悬液、溶血素和生理盐水，不加入补体，观察是否发生溶血。 **阳性对照**： - **完整反应组**：加入绵羊红细胞悬液、溶血素、补体和生理盐水，按照经典途径的条件设置，观察是否发生溶血。 **空白对照**： - **红细胞悬液组**：仅加入绵羊红细胞悬液和生理盐水，观察红细胞自身稳定性。 ##### 3. 实验操作 1. **准备试管**：将试管编号，分为阴性对照组（2组）、阳性对照组和空白对照组。 2. **加样**： - **阴性对照（无抗体组）**：试管中加入绵羊红细胞悬液、补体、生理盐水，不加溶血素。 - **阴性对照（无补体组）**：试管中加入绵羊红细胞悬液、溶血素、生理盐水，不加补体。 - **阳性对照（完整反应组）**：试管中加入绵羊红细胞悬液、溶血素、补体和生理盐水。 - **空白对照（红细胞悬液组）**：试管中加入绵羊红细胞悬液和生理盐水。 3. **混匀与孵育**：将各试管轻轻震荡混匀，置于37℃水浴中孵育30分钟。 4. **观察结果**：记录各试管中溶液的颜色变化，判断溶血是否发生。 #### 实验结果判定 - **阳性对照**：溶液变为红色透明，表明溶血发生。 - **阴性对照（无抗体组）**：溶液保持红色不透明，无溶血发生。 - **阴性对照（无补体组）**：溶液保持红色不透明，无溶血发生。 - **空白对照（红细胞悬液组）**：溶液保持红色不透明，红细胞未受损。 #### 结论 通过本实验，可以明确溶血发生的充要条件为：抗原与特异性抗体结合后，在补体的参与下，才能引发溶血作用。同时，合理设置的对照实验确保了实验结果的准确性和可靠性。
