核糖体展示技术（Ribosome Display Technology, RDT）的原理可以归纳如下： 1. **基础概念**： - 核糖体展示技术是一种在蛋白质筛选和改造中广泛应用的技术，由Plückthun实验室在多聚核糖体展示技术的基础上改进而来。 - 该技术将正确折叠的蛋白及其mRNA同时结合在核糖体上，形成mRNA-核糖体-蛋白质三聚体，实现了目的蛋白基因型和表型的直接联系。 2. **技术流程**： - **DNA文库构建**：通过聚合酶链反应（PCR）扩增DNA文库，并引入T7启动子、核糖体结合位点及茎-环结构，将DNA转录成mRNA。 - **体外翻译**：在无细胞翻译系统中，使mRNA的翻译产物（即目的蛋白）展示在核糖体表面，形成“mRNA-核糖体-蛋白质”复合物，构成核糖体展示的蛋白文库。 - **筛选**：利用相应的抗原从翻译混合物中筛选特定的复合物，并通过乙二胺四乙酸（EDTA）解离或特异抗原洗脱的方式，分离出mRNA。 - **富集与测序**：通过反转录聚合酶链反应（RT-PCR）提供下一轮展示的模板，所得DNA进入下一轮富集，部分DNA可通过克隆进行测序分析。 3. **应用**： - 该技术已成功应用于筛选与靶分子特异结合的高亲和力蛋白质，如抗体、多肽、酶等，是蛋白质筛选和改造的重要工具。 - 核糖体展示技术在抗体及蛋白质文库选择、蛋白质体外改造等领域具有广泛的应用前景。 4. **特点**： - 核糖体展示技术通过mRNA-核糖体-蛋白质三聚体的形式，直接联系蛋白质的基因型和表型，提高了筛选效率。 - 该技术不需要复杂的宿主系统，减少了潜在的系统误差和交叉反应。 - 该技术适用于大规模筛选，能够快速地获得具有高亲和力和特异性的蛋白质。 综上所述，核糖体展示技术通过mRNA-核糖体-蛋白质三聚体的形式，实现了蛋白质基因型和表型的直接联系，为蛋白质筛选和改造提供了一种高效、准确的方法。
